4. PROCEDIMENT EXPERIMENTAL

4.2. Preparació dels medis de cultiu

4.2.1. Preparació medi complex

Introducció

Un medi de cultiu complex conté hidrolitzats proteics que aporten els nutrients necessaris sense  que es conegui  estrictament la seva composició. En aquesta pràctica s'utilitzarà el de triptona de soja. (TSB).

 

Material

• 2 ampolles amb tap de 1 L

Reactius

• Caldo de triptona de soja (Eur.Pharma.) (TSB)

Procediment

• S’omplen les dues ampolles amb 1L H2O destil·lada i s’hi afegeixen 30g de TSB.

• S’agiten  per homogeneïtzar la mescla i s’autoclaven a 121 ºC i 1atmosfera durant  15 minuts.

4.2.2. Preparació medi mínim

Introducció

Un  medi de cultiu mínim conté sals minerals i una font de carboni orgànica. En aquesta pràctica s’utilitza un medi mímim basat en el medi mineral M9 i suplementat amb glucosa.

Material

• 2 Ampolles amb tap de 1L

• 3 Xeringues estèrils de 10 mL

• 3 filtres de 0,22 micres

Reactius

Na₂HPO₄ , KH₂PO₄ , NaCl , NH₄Cl , MgSO₄ , CaCl₂ , Glucosa

Procediment

Per preparar 1 L de medi mínim  es dissolen les següents quantitats de les sals
en 990 mL d’aigua destil.lada:

• Sals
  • 6 g Na₂HPO₄
  • 3 g KH₂PO₄
  • 0,5g NaCl
  • 1 g NH₄Cl

Un cop preparat el medi s’ajusta  a pH a 7,4 amb hidròxid de sodi 1 M i s’autoclava la solució a 121ºC, 1 atm durant 15 minuts.

A la solució anterior a temperatura ambient, , s’addicionen els següents volums de les solucions esterilitzades per filtració:

• 0,2 mL MgSO₄ 1M
• 0,1mL CaCl₂ 1M
• 10 ml de solució de glucosa al 25 % (P/V)